產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

  Polybrene（聚凝胺）是一種多聚陽(yáng)離子聚合物，常用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)以增強(qiáng)脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率。Polybrene目前廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒及慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染，作用機(jī)理可能是通過中和細(xì)胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進(jìn)吸附作用。Polybrene也是一種有名的抗肝素劑（肝素拮抗劑），常用來(lái)生產(chǎn)非特異性凝集的紅細(xì)胞。另外Polybrene也多用于蛋白測(cè)序，因?yàn)樾┝康腜olybrene在自動(dòng)測(cè)序分析中可明顯改善多肽的降解現(xiàn)象。

本產(chǎn)品為即用型溶液，粉末用0.9%NaCl配置成10mg/ml的溶液，并用0.22μM濾膜過濾除菌。使用時(shí)一般按1：1000-1：2000稀釋，依細(xì)胞種類不同稀釋比例不同，具體查閱相關(guān)文獻(xiàn)。

注：Polybrene對(duì)某些細(xì)胞（如末端分化的神經(jīng)元，DC細(xì)胞）毒性較大，初次應(yīng)用建議先做毒性測(cè)試。

使用方法（僅供參考）：

實(shí)驗(yàn)1：逆轉(zhuǎn)錄病毒感染（RetroviralInfection）

（1）重組逆轉(zhuǎn)錄病毒原液的制備：取5ml生長(zhǎng)培養(yǎng)基加入約含單層轉(zhuǎn)染逆轉(zhuǎn)錄包裝細(xì)胞的100mm培養(yǎng)盤內(nèi)。孵育24h后，吸去培養(yǎng)液并用0.45μm濾器過濾。

（2）待感染細(xì)胞的培養(yǎng)：100mm培養(yǎng)盤內(nèi)加入10ml完全培養(yǎng)基，細(xì)胞密度約為5×105/盤。

（3）病毒感染：細(xì)胞培養(yǎng)24h后，吸去完全培養(yǎng)液。用含polybrene的2ml病毒上清（或?qū)⒉《驹合♂尩?ml）感染細(xì)胞，polybrene的終濃度為5μg-10μg/ml。37°C孵育3-6h。

（4）收集病毒顆粒：加入8ml完全培養(yǎng)基。感染3天后，按照1:5的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)2：轉(zhuǎn)染

（1）完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,培養(yǎng)細(xì)胞密度約50%；

（2）孵育細(xì)胞18-24h后準(zhǔn)備DNA-培養(yǎng)基-Polybrene混合液，按如下操作制備混合液：

①添加完全培養(yǎng)基（60mm培養(yǎng)皿2ml，100mm培養(yǎng)皿3ml）37°C預(yù)熱；

②添加10ng~10μg質(zhì)粒輕輕混勻；

③加入Polybrene至終濃度為5μg-10μg/ml。輕輕混勻。以上每個(gè)成分需要按順序加入。

（3）去除培養(yǎng)基，在細(xì)胞中加入DNA-培養(yǎng)基-Polybrene溶液，在37°C孵育細(xì)胞6-20h。細(xì)胞培養(yǎng)的前6h內(nèi)約每1.5h輕柔混勻。

（4）去除DNA-培養(yǎng)基-Polybrene溶液。用DMSOshocksolution（15%DMSOin1×HBSS）輕輕蓋住細(xì)胞（60mm培養(yǎng)皿3ml，100mm培養(yǎng)皿4ml）。每次加入溶液時(shí)用手輕輕搖晃培養(yǎng)盤10s，使得液體均勻分布。然后37℃孵育細(xì)胞4min。

（5）立即去除DMSOshocksolution，用完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基輕輕清洗細(xì)胞2次。對(duì)于60mm培養(yǎng)皿每次用5ml培養(yǎng)液清洗，100mm培養(yǎng)皿每次用10ml培養(yǎng)液清洗。

（6）加入完全培養(yǎng)基到細(xì)胞中；

（7）穩(wěn)定轉(zhuǎn)化：去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，按照1:5的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細(xì)胞。瞬時(shí)表達(dá)：去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，加入新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。24-72h后收獲細(xì)胞。

參考濃度：

見說(shuō)明書

注意事項(xiàng)：

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

保存條件：

4℃避光保存一年，-20℃避光可保存兩年。