Reactive Oxygen Species Assay Kit

活性氧檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介：

活性氧檢測試劑盒是一種利用熒光探針H2DCFH-DA進(jìn)行活性氧檢測的試劑盒。H2DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH，而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。根據(jù)活細(xì)胞中熒光的產(chǎn)生，可以判斷細(xì)胞活性氧的含量和變化。用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察，是一種經(jīng)典的組織或活細(xì)胞中活性氧檢測方法。

本試劑盒提供了活性氧陽性對照試劑Rosup，以便于活性氧的檢測。Rosup是一種活性氧陽性誘導(dǎo)藥物，濃度為50mg/mL，根據(jù)其熒光信號強(qiáng)度，可分析活性氧的實際水平。

本試劑盒本底低，靈敏度高，線性范圍寬，使用方便。

本試劑盒可以測定1000個樣品（以96孔板為標(biāo)準(zhǔn)）。

產(chǎn)品組成：

圖例：使用活性氧檢測試劑盒來顯示CHO細(xì)胞內(nèi)活性氧熒光。左圖為CHO細(xì)胞用試劑盒配備的活性氧陽性對照處理；右圖為正常CHO細(xì)胞。綠色熒光表明細(xì)胞活性氧急劇增加，并能顯示其定位。

注意事項：

1、  探針裝載后，一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針，否則會導(dǎo)致背景較高。

2、  陽性對照Rosup 一般使用濃度為50ug/ml（推薦濃度50-200μM，具體依細(xì)胞類型而定）。通常刺激后0.5-4h可觀察到顯著的活性氧水平升高。對于不同的細(xì)胞，活性氧陽性對照的效果可能有較大的差別。如果在刺激后30 min內(nèi)觀察不到活性氧的升高，可延長誘導(dǎo)時間或適當(dāng)提高活性氧陽性對照的濃度。如果活性氧升高得過快，可縮短誘導(dǎo)時間或適當(dāng)降低活性氧陽性對照的濃度。

3、  對于某些特別的細(xì)胞，實驗過程中如果發(fā)現(xiàn)沒有刺激的陰性對照細(xì)胞熒光也比較強(qiáng)， 可以按照1:2000-1:5000稀釋DCFH-DA，使DCFH-DA的終濃度為2-5μM，濃度過高容易出現(xiàn)非特異性染色。探針裝載的時間也可以根據(jù)情況在15-60 min內(nèi)適當(dāng)進(jìn)行調(diào)整。

4、  活性氧陽性對照（Rosup）僅僅用于作為陽性對照的樣品，其他正常實驗樣品無需加入。

5、  探針裝載完畢并洗凈殘余探針后，可以進(jìn)行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描，以確認(rèn)探針的裝載情況是否良好。DCF的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜請參考上圖。

6、  盡量縮短探針裝載后到測定所用的時間（刺激時間除外），因為探針容易氧化，導(dǎo)致本底熒光值升高，所以建議工作液現(xiàn)用現(xiàn)配，以減少各種可能的誤差。

7、  如果定量的話需要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。先做一個不同濃度H₂O₂氧化DCFA熒光值，做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，X軸為H₂O₂濃度，y軸是熒光值，得出一個方程，再看樣品的熒光值即Y值是多少，對應(yīng)的X值即對應(yīng)的H₂O₂濃度。

8、  實驗組熒光值不高可能是因為有的細(xì)胞在裝載探針后細(xì)胞容易漂起來，洗細(xì)胞時實驗組會吸走一部分細(xì)胞。所以在種細(xì)胞時可以把細(xì)胞量增加一倍，這樣細(xì)胞緊密連接，貼壁比較牢，實驗組的熒光值就高了。

9、  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：

-20℃避光保存，有效期一年。