紅細(xì)胞裂解液 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

紅細(xì)胞裂解液是一種用于從人或鼠等的血液或組織樣品中裂解并去除無細(xì)胞核紅細(xì)胞的溶液。經(jīng)過優(yōu)化配方，在裂解紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。主要有效成分為氯化銨。不適用于有細(xì)胞核紅細(xì)胞的裂解，例如鳥或禽類的紅細(xì)胞。已經(jīng)過無菌處理，處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)。

使用說明：

對(duì)于組織細(xì)胞樣品：

1、新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液，離心棄上清。

2、加入3-5倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體積為1ml，則加入3-5ml的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。

3、400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。

5、洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500g離心2-3分鐘，棄上清。可再重復(fù)1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

對(duì)于組織細(xì)胞樣品無需洗滌的快速操作步驟：

1、新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液，離心棄上清。

2、對(duì)于0.2ml細(xì)胞沉淀加入1ml紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。

3、加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。

4、400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

5、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

說明：對(duì)于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程中的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時(shí)不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管。

對(duì)于血液樣品：

1、取新鮮抗凝血，400-500g離心5分鐘，離心棄上清。

2、加入6-10倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體積為1ml，則加入6-10ml的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對(duì)于鼠的血液，裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至4-5分鐘，并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

3、 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。

5、洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500g離心2-3分鐘，棄上清。可再重復(fù)1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意：對(duì)于微量或少量的血液樣品，可在第*步中不進(jìn)行離心棄上清的操作，直接在第二步中加入10倍血液體積的紅細(xì)胞裂解液，并在室溫或4℃裂解4-5分鐘。對(duì)于鼠的血液，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10分鐘，但通常不宜超過15分鐘，并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。后續(xù)步驟相同。

對(duì)于血液樣品無需洗滌的快速操作步驟：

1、每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對(duì)于鼠的血液，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10分鐘，但通常不宜超過15分鐘，并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

2、加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。

3、 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。

5、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意：對(duì)于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時(shí)不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管。

注意事項(xiàng)：

1、本裂解液為無菌產(chǎn)品，請(qǐng)注意保持無菌，使用本產(chǎn)品時(shí)宜在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。

2、 如果經(jīng)過紅細(xì)胞裂解液處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細(xì)胞時(shí)不必使用經(jīng)過DEPC處理過的溶液。

3、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

保存條件：

4℃保存，一年有效。室溫保存，3個(gè)月有效。